2023年2月，我院鲍恩东教授课题组在著名期刊antiviral research（if=10.1，2022年）上在线发表了题为“recombinant pseudorabies virus (prv) expressing stabilized e2 of classical swine fever virus (csfv) protects against both prv and csfv”的研究论文，描述了经过理性设计的稳定化猪瘟e2蛋白，将其作为免疫原插入伪狂犬病毒（prv）载体，成为二价活载体疫苗以同时预防猪瘟病毒（csfv）和prv的感染。
伪狂犬病（pr）和猪瘟（csf）是具有重要经济价值的猪传染病。国内大多数养殖场都对这两种疾病进行免疫接种。利用prv载体表达csfv的e2蛋白（prv-e2）作为二价疫苗已有报道，但在目前的情况下，prv-e2刺激产生的e2抗体水平并不能达到预期水平。
本研究将热稳定性评价指标与e2蛋白进化信息相结合，选取e2蛋白48个高变异位点，每个位点有2-5种备用氨基酸，对每个氨基酸的相对热力学能量进行比较，最终得到热力学能量最低的突变体e2序列（稳定化的e2）。获得的稳定化的e2序列，其热力学能量较原始序列降低了22个rosetta能量单位，体外表达和纯化稳定化的e2蛋白表明其对应的热稳定性提高了10.5倍，免疫小鼠后可以产生比原始蛋白更高水平的抗体。基于缺失tk和ge基因的减毒prv可作为递送外源蛋白的载体，prv载体免疫后可感染宿主细胞，并在细胞内表达外源蛋白，之后外源蛋白分泌到细胞外，刺激体液免疫，产生针对外源蛋白的抗体。本研究构建的表达稳定化e2蛋白的重组prv疫苗，其e2蛋白的分泌效率提高了2.97倍，免疫小鼠后抗体水平提高了2倍，免疫家兔后可同时预防prv强毒的致死性攻击和csfv引起的定型热。这些结果表明，本研究构建的活载体重组株是一种有希望同时预防csfv和prv感染的二价疫苗。
南京农业大学动物医学院博士研究生孙阳阳为该论文的第一作者，鲍恩东教授、云涛研究员为该论文的通讯作者。该研究由浙江省自然科学基金项目(2023c02023)、浙江省公益研发项目(no.lgn21c180002)和江苏省农业科技自主创新资金项目cx(22)2016等基金资助。
文章链接：https://doi.org/10.1016/j.antiviral.2023.105548
